下调Claspin抑制肝癌增殖的研究

作者：李娟; 孙冉冉; 孙继红; 朱威威; 宋瑞鹏; 余祖江^*

来源：中华实验外科杂志, 2018, 35(09): 1743-1746.

• Claspin
• 肝细胞肝癌
• 基因表达
• 增殖

目的探讨Claspin(CLSPN)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达与患者临床特征的关系,观察其下调后抑制肝癌增殖。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析Claspin基因在374例肝癌组织和50例癌旁组织中的表达及其与患者生存和临床特征的关系;应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法和Western blot检测Claspin基因在Hep3B细胞株中的表达;应用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成实验鉴定Claspin下调后Hep3B细胞的增殖和克隆形成能力。经G418筛选稳定株接种裸鼠皮下成瘤,分3组,每组6只,绘制肿瘤生长曲线及组织学检查。结果 TCGA数据库分析可见Claspin基因在肝癌组织(5. 643±1. 599)中表达明显高于正常肝组织(2. 752±1. 674)(t=11. 941,P=0. 000),且在肝癌患者中Claspin基因低表达者总体生存(OS)时间和无疾病进展生存(PFS)时间均明显长于高表达者[(3.659±0. 355)年比(2. 289±0. 357)年,Log Rank值=15. 993,P=0. 000;(6. 072±0. 426)年比(4.771±0.462)年,Log Rank值=11. 830,P=0. 001]; Claspin基因的表达高低与肝癌的病理TNM分期(χ2=6.149,P=0.013)、分化程度(χ2=8.563, P=0.003)、甲胎蛋白水平(χ2=11. 202,P=0. 001)显著相关,COX回归分析可见Claspin基因表达高低是患者生存的独立预测因素(r=0. 579,P=0. 009)。Claspin表达下调后与空白组比较,Hep3B细胞的增殖能力在72 h时明显受抑制,抑制率为[(71.316±2.471)%, t=4. 823,P=0. 000],相对克隆形成细胞数明显减少[(28.000±3.152)%,t=39.540,P=0.000]。裸鼠皮下肝癌移植瘤,Claspin下调组瘤体[(144. 300±15. 340) mm3]生长速度明显低于空白组[(377. 000±20. 280) mm3,t=22. 410,P=0. 000]或阴性对照(NC)组[(363. 300±26. 980) mm3,t=17. 280,P=0. 000];下调组Claspin蛋白表达显著低于空白组(t=8. 367,P=0.000)及NC组(t=9. 303,P=0. 000)。结论在肝癌中Claspin显著高表达,Claspin高表达与肝癌预后差明显正相关,下调Claspin能抑制肝癌细胞和裸鼠移植瘤增殖。

• 单位
  郑州大学第一附属医院