细胞穿膜肽与人表皮生长因子在大肠杆菌中的重组融合表达

作者：李风; 柯博文; 孙中伟; 韩双艳

来源：现代食品科技, 2021, 37(11): 151-158+260.

DOI：10.13982/j.mfst.1673-9078.2021.11.0232

• 人表皮生长因子(h EGF)
• 细胞穿膜肽(CPPs)
• 融合表达
• 蛋白分离纯化

该研究构建了细胞穿膜肽Pep-1和人表皮生长因子h EGF融合基因(ep EGF)的重组表达质粒PGEX-4T-1-ep EGF,并成功转化大肠杆菌BL21(DE3)得到重组大肠杆菌株BL21(DE3)/PGEX-4T1-ep EGF。通过IPTG诱导发酵,制备重组融合人表皮生长因子蛋白,并初步尝试建立纯化研究,有效实现了人表皮生长因子(h EGF)在大肠杆菌中的可溶性表达。该研究通过发酵条件优化,发现发酵过程中温度、诱导剂浓度、诱导时间、培养基都是影响蛋白表达量的关键因素;温度在20℃、IPTG浓度0.4 mmol/L、诱导时间8h、培养基为TB液体培养基,目的蛋白占总蛋白的量达到21.58%,蛋白浓度为0.13mg/m L。菌体破碎液上清经过GST亲和层析融合蛋白纯度达到66.82%,阴离子交换层析后融合蛋白纯度达到92.57%。该研究成功在大肠杆菌中表达出可溶形式的h EGF,且纯化工艺较简单,为h EGF的进一步开发利用提供了参考。

• 单位
  华南理工大学