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摘要
目的研究不同分化时间对体外单层贴壁培养的大脑皮层神经干细胞(NSCs)分化成星形胶质细胞和神经元的影响。方法 (1)体外分离、培养胎鼠大脑皮层原代NSCs,采用细胞免疫荧光染色检测P2代神经球和吹散成单细胞的NSCs中巢蛋白、Sox2的表达;(2)取P2代神经球吹散成单细胞,接种于圆玻片上培养过夜,次日更换诱导分化培养基,分别继续培养1d、3d、5 d,采用细胞免疫荧光染色检测细胞神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、Tuj1的表达,分析神经元突起的平均数量、平均最长长度和平均分枝水平;(3)取接种于12孔细胞培养板上的NSCs分化样品,采用实时荧光定量PCR检测NSCs不同分化时间点巢蛋白、CFAP、Tuj1 mRNA的表达。结果(1)细胞免疫荧光染色检测显示神经球、单层贴壁培养细胞几乎均为巢蛋白和Sox2双阳性细胞,说明培养的细胞几乎全部是NSCs。(2)分化3 d组、分化5 d组NSCs中GFAP+细胞比例高于分化1 d组,分化5 d组NSCs中Tuj1+细胞比例高于分化1 d组、分化3 d组,差异均有统计学意义(P<0.05);分化3d组、分化5 d组所分化神经元突起的平均数量、平均分枝水平均高于分化1d组,差异有统计学意义(P<0.05);分化1 d组、分化3 d组、分化5 d组所分化神经元突起的平均最长长度依次增加,差异有统计学意义(P<0.05);(3)与分化1 d组、分化3 d组比较,分化5 d组NSCs中巢蛋白mRNA的表达降低,GFAP、Tuj1 mRNA的表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论随着分化时间的增加,体外单层贴壁培养的NSCs分化出的星形胶质细胞和神经元的数量增多,细胞形态变复杂,神经元突起也越来越成熟,巢蛋白mRNA的表达降低,GFAP和Tuj1mRNA的表达上升。
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