SELEX技术中ssDNA文库PCR扩增条件的优化

作者：曹立亭; 许李丽; 万向; 王秋菊; 马跃

来源：安徽农业科学, 2012, (06): 3241-3242+3297.

DOI：10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.06.010

• 随机单链DNA文库
• 正交试验设计
• PCR
• 体系优化 Random single-stranded DNA pool
• Orthogonal experimental design
• Polymerase chain reaction
• System optimization

[目的]对SELEX技术中ssDNA文库的PCR扩增条件进行优化。[方法]采用L16(45)正交试验设计在4个水平上对影响单链随机DNA文库PCR反应体系的Mg2+浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶含量、引物浓度和随机单链DNA文库量5个重要因素进行了优化,同时对PCR反应的退火温度和循环次数进行了优化,确立最优反应体系和扩增程序。[结果]20μlPCR反应体系及反应程序中各因素优化组合为:10×Buffer2.0μl,随机ssDNA文库0.5ng,Mg2+2.5mmol/L,dNTP Mixture0.25mmol/L,上下游引物各0.6μmol/L,Taq DNA聚合酶1.5U;退火温...

• 单位
  西南大学荣昌校区