目前大多数的DNA shuffling方法都需要PCR过程。由于一些限制内切酶的识别位点与切割位点不重叠而产生不同的黏性末端,当再连接的时候,同源片段之间就可以混合起来按照正确顺序组装成新的嵌合体分子。利用这种性质,构建了一种新的、无PCR过程的、简便的shuffling方法。