摘要
目的 探讨沉默circ_HECTD1表达对无镁诱导的神经元细胞circHECTD1表达、细胞活力、凋亡率及炎性因子表达的影响及机制。方法 从新生24 h的SD大鼠分离海马神经元进行原代培养,取培养10 d的海马神经元,将细胞分为对照组(无镁细胞外液处理3 h后恢复为正常细胞培养液培养)、无镁组(无镁细胞外液处理细胞3 h)、无镁+si-NC组(无镁细胞外液处理前30 min给予si-NC处理)和无镁+si-circ_HECTD1组(无镁细胞外液处理前30 min给予si-circ_HECTD1处理)。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测si-circ_HECTD1、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)基因表达;四唑盐(MTT)及DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL)分别检测细胞活力和凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、cleaved caspase 3和核转录因子-κB(NF-κB)/p65蛋白表达。结果 与对照组比较,无镁组和无镁+si-NC组circ_HECTD1、Bax、cleaved caspase 3、 IL-6、IL-1β和NF-κB/p65表达均明显升高,Bcl-2表达降低,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05),与无镁+si-NC组比较,无镁+si-circ_HECTD1组circ_HECTD1、Bax、cleaved caspase 3、IL-6、IL-1β和NF-κB/p65表达均明显降低,Bcl-2表达升高,细胞活力升高,细胞凋亡率降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 抑制circ_HECTD1表达可降低癫痫海马神经元细胞凋亡及炎症反应,机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。
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