全长SOD2重组蛋白的可溶表达、纯化、稳定性与跨膜效应

作者：潘剑茹; 陈莉娟; 何火聪; 苏颖; 王香玲; 李娴; 陈翠煌; 吴伦巧; 刘树滔

来源：生物工程学报, 2017, 33(07): 1168-1177.

DOI：10.13345/j.cjb.170007

• Mn超氧化物歧化酶
• 构建
• 融合蛋白
• 表达纯化
• 稳定性
• 跨膜效应

超氧化物歧化酶(SOD)家族是保护细胞免受正常代谢过程中产生的活性氧(ROS)毒性所必需的,含Mn2+离子的超氧化物歧化酶(Mn-SOD,SOD2)是其中最重要的一种。本研究合成了人源SOD2全基因序列,并将其插入带有GST的原核表达载体p GEX-4T-1中,成功构建了GST-SOD2融合蛋白表达质粒。然后,将重组质粒p GEX-4T-1-SOD2转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG在25℃下诱导表达融合蛋白,得到可溶性GST-SOD2融合蛋白,经GST亲和树脂纯化得到比活为1 788 U/mg的纯蛋白,分子量约为46 k Da。利用凝血酶切去GST标签后经肝素亲和柱纯化得到了电泳纯的SOD2重组蛋白,该蛋白分子量约为25 k Da,与SOD2全长序列的理论分子量相符,比活为2 000 U/mg。两种重组SOD2蛋白在生理条件下都具有良好的SOD活性,且都具有显著的跨膜能力(P<0.05)。这些工作为深入研究两种全长重组SOD2蛋白的结构与生物效应建立了基础。

• 单位
  福州大学; 福建省肿瘤医院; 福建省科学技术厅