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摘要
目的 探讨SPON2对胃癌细胞的影响及其机制。方法 收集2019-11-16-2021-2-24,在深圳市人民医院行胃癌根治术的7例原发性胃癌患者标本。蛋白质印迹法检测胃癌样本中SPON2、Cyclin D1和PCNA的表达，并对蛋白相对水平进行线性回归分析。以胃癌细胞株BGC-823和AGS为模型，转染SPON2 shRNA或SPON2 cDNA,检测SPON2对细胞增殖、细胞周期进程和DNA复制的影响。BGC-823细胞随机分成shNC组、shSPON2组、pcDNA-CCND1组、shSPON2+pcDNA-CCND1组，AGS细胞随机分成pcDNA-Vector组、pcDNA-SPON2组、shCTNNB1组、pcDNA-SPON2+shCTNNB1组、shCCND1组、pcDNA-SPON2+shCCND1组。蛋白质印迹法检测Cyclin D1蛋白表达水平，实时定量PCR检测Cyclin D1的mRNA水平，双荧光素酶报告基因实验检测转录因子与Cyclin D1启动子的结合。通过转染Cyclin D1 shRNA或Cyclin D1 cDNA,检测Cyclin D1对SPON2调控胃癌细胞增殖的影响。结果 在BGC-823细胞中，shSPON2组细胞相对增殖能力为0.58±0.07,低于shNC组细胞的相对增殖能力(1.00±0.09),差异有统计学意义，t=5.061,P=0.007。在AGS细胞中，pcDNA-SPON2组细胞相对增殖能力为1.58±0.19,高于pcDNA-Vector组细胞的相对增殖能力(1.00±0.13),差异有统计学意义，t=3.463,P=0.026。此外，与shNC组相比，shSPON2组Cyclin D1蛋白表达降低，而与pcDNA-Vector组相比，pcDNA-SPON2组Cyclin D1蛋白表达增加。实时定量PCR实验结果显示，Cyclin D1 mRNA相对表达量在shSPON2组中(0.47±0.12)比shNC组中(1.00±0.11)低，差异有统计学意义，t=4.595,P=0.010。而Cyclin D1 mRNA相对表达量在pcDNA-SPON2组中(2.80±0.19)比pcDNA-Vector组中(1.00±0.17)高，差异有统计学意义，t=10.010,P<0.001。与shNC组[(100.00±7.38)%]相比，shSPON2组[(47.94±5.43)%]中Cyclin D1的转录活性降低，差异有统计学意义，t=8.036,P=0.001。而pcDNA-SPON2组[(216.92±26.51)%]与pcDNA-Vector组[(100.00±5.80)%]相比Cyclin D1的转录活性升高，差异有统计学意义，t=6.093,P=0.004。结论 SPON2通过上调Cyclin D1的转录水平和蛋白表达促进胃癌细胞增殖。
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