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摘要
目的构建TIEG基因siRNA慢病毒载体。方法针对已经筛选确定的TIEG基因siRNA有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA退火形成双链DNA与经BamH Ⅰ和EcoRI酶切后的PshRNA-copGFP-lentivector慢病毒载体[含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生psiR NA-TIEG慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定,用psiRNA-TIEG和病毒包装系统共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度;用包装病毒颗粒注射大鼠,通过RealTime-PCR检测大鼠肾组织TIEG mRNA的表达水平。结果PCR和测序证实,成功构建TIEG siRNA慢病毒载体psiRNA-TIEG,包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为1×105ifu/μL;实验组大鼠TIEGmRNA的表达水平明显低于对照组(50.7%)。结论成功构建大鼠TIEG基因siRNA慢病毒载体psiRNA-TIEG。
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