钙库调控的钙通道Orai1体外研究方法的建立

作者：武福云; 姚美连; 吴胜英; 汪雄; 李珊^*

来源：中国生物工程杂志, 2018, 38(09): 41-47.

DOI：10.13523/j.cb.20180906

• 钙通道
• Orai1蛋白
• 体外研究

目的:建立钙通道Orai1的体外研究方法。方法:利用脂质体重组技术,将体外纯化的Orai1蛋白重组到脂质体膜上,利用蔗糖密度梯度离心来检测其重组效率及Orai1蛋白在脂质体膜上的结构,并利用钙染料Fura-2检测脂质体内钙离子的释放。结果:成功制备了脂质体及体外纯化了GST-Orai1融合蛋白,蔗糖密度梯度离心结果证明GST-Orai1蛋白成功重组到脂质体上,以及Orai1蛋白以多聚体的形式定位在脂质体膜上。钙离子释放实验证明脂质体内钙离子包装完好,可用于后续Orai1钙通道的功能研究。结论:利用脂质体重组技术建立了一种新的Orai1的研究方法,能够更直接有效地研究其功能及其活化机制。

• 单位
  基础医学院; 湖北医药学院