多房棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆、表达及其免疫诊断价值初步评价

作者：孙立; 林仁勇; 房彬彬; 李亮; 毕晓娟; 王慧^*

来源：中国病原生物学杂志, 2019, 14(06): 634-642.

DOI：10.13350/j.cjpb.190604

• 泡型包虫病
• 多房棘球绦虫
• 免疫诊断
• 硫氧还蛋白过氧化物酶
• 重组蛋白

目的克隆多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)硫氧还蛋白过氧化物酶(Thioredoxin peroxidase, TPx)基因,构建原核表达载体,诱导表达EmTPx蛋白,并初步评价其免疫诊断价值。方法从沙鼠中分离多房棘球绦虫原头蚴,提取总RNA,采用RT-PCR方法获取EmTPx的cDNA片段,克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组表达质粒pET-28a-EmTPx,转化大肠埃希菌BL21进行目的蛋白的诱导表达及纯化,免疫小鼠制备抗EmTPx重组蛋白(rEmTPx)的多抗血清。通过Western blot对rEmTPx的免疫学特性进行鉴定,通过间接ELISA试验评价其免疫诊断价值。结果 PCR扩增EmTPx基因片段长度为582 bp,测序证实重组表达质粒pET-28a-EmTPx构建正确,表达的目的蛋白相对分子质量约为26×103,与理论值相符。Western blot显示该蛋白可被鼠抗rEmTPx多抗血清识别,以rEmTPx为抗原采用间接ELISA法检测AE患者血清,特异抗体的敏感性为66.2%,特异性为87.5%。结论成功构建了pET28a-EmTPx原核表达载体,表达蛋白具有Em原头蚴天然TPx的生物学功能表位,且具有一定的免疫学诊断价值,可作为AE血清学诊断的候选靶抗原。

• 单位
  基础医学院; 新疆医科大学; 新疆医科大学第一附属医院