miR-499在肝癌发生和发展中的作用机制研究

作者：李宝华; 戈海泽; 刘树业^*

来源：检验医学与临床, 2020, 17(08): 1012-1016.

• miR-499
• 肝癌
• Huh7细胞
• RAB5C
• 细胞增殖

目的以肝癌细胞系Huh7细胞为模型,研究miR-499在肝癌发生和发展中的作用机制。方法通过TCGA和GEO数据库分析miR-499在肝癌患者及健康人中的表达差异,并通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肝癌组织及正常癌旁组织中miR-499的表达差异。通过临床病例分析miR-499与肝癌患者临床指标的关系。采用CCK-8试验、集落形成试验检测miR-499对Huh7细胞活性及集落形成的影响。采用流式细胞术检测miR-499对Huh7细胞周期及相对凋亡率的影响。用TargetScan7.1、MicroRNA.org、MiRDB等数据库预测miR-499的下游靶基因。通过RT-qPCR及Western blot试验证明miR-499对RAB5C mRNA及蛋白水平的影响。结果 TCGA和GEO数据库数据显示,miR-499在肝癌患者中呈低表达。RTqPCR结果表明,miR-499在肝癌组织中的表达明显低于癌旁组织。临床数据整理表格显示,肝癌患者中miR-499高表达的患者普遍肿瘤体积较小、TNM分期较低、淋巴结转移能力较弱且分化良好。miR-499mimics转染Huh7细胞后,通过CCK8试验和集落形成试验发现,miR-499抑制Huh7细胞增殖及集落形成能力。流式细胞术细胞周期与凋亡试验表明,miR-499抑制Huh7细胞的周期进程,并且促进Huh7细胞的凋亡能力。RT-qPCR及Western blot试验证明,RAB5C确为miR-499的靶基因。结论 miR-499通过直接靶定并下调RAB5C的表达,从而抑制肝癌的发生和发展。

• 单位
  天津市第三中心医院