空肠弯曲菌NCTC11168基因组表达文库的构建及鉴定

作者：胡元庆; 黄金林; 李求春; 刘志成; 潘志明; 焦新安

来源：中国兽医科学, 2011, (11): 1106-1110.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2011.11.002

• 空肠弯曲菌
• 基因组表达文库
• 毒力因子 Campylobacter jejuni
• genomic expression library
• virulence factor

将空肠弯曲菌NCTC11168基因组用Sau3AⅠ部分酶切,回收400～3 000bp的片段。用BamHⅠ酶切原核表达载体pET30a(b,c),用SAP去磷酸化后,切胶回收线性载体片段。将基因组片段与载体按摩尔比例10∶1连接,转化DH5α感受态细胞,PCR分析插入片段大小的分布和插入的正确率。从转化的平板上提取质粒,转化表达宿主菌BL21(DE3),获得基因组表达文库。用IPTG诱导BL21(DE3),SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。提取基因组,以0.5U/μg Sau3AⅠ于37℃部分酶切基因组,回收400～3 000bp片段。载体用2.5U/μg BamHⅠ线性化后,用0.8U/μg...

• 单位
  扬州大学