RNA干扰对低氧诱导的心脏成纤维细胞结缔组织生长因子的表达和胶原合成的影响

作者：孙家扬; 刘春涛; 黄妮雯

来源：四川大学学报（医学版）, 2011, 42(02): 208-212.

DOI：10.13464/j.scuxbyxb.2011.02.009

• RNA干扰
• 心脏成纤维细胞
• 低氧
• 结缔组织生长因子
• 胶原

目的研究慢病毒载体pGCL-GFP介导的结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA(CTGF-ShRNA)干扰质粒对低氧诱导的大鼠心脏成纤维细胞(CFs)CTGF表达、细胞增殖和胶原合成的影响。方法构建并筛选CTGF-ShRNA干扰质粒,PCR鉴定阳性克隆,重组质粒转染后随机分为4组,正常(Control)组,低氧(Hypoxia)组,低氧+慢病毒空载体(Hypo+pGCL-GFP)组和低氧+CTGF-ShRNA(Hypo+CTGF-ShRNA)组,实时荧光定量PCR及Western blot分析4组CFs CTGF mRNA及蛋白的相对表达水平,WST-1试剂盒和羟脯氨酸检测试剂盒分别检测4组细胞增殖情况和培养基中的胶原含量。结果成功构建并筛选CTGF-shRNA。与Control组比较,Hypoxia组、Hypo+pGCL-GFP组、Hypo+CTGF-ShRNA组CTGFmRNA相对表达水平升高(P<0.05),CTGF蛋白相对表达水平升高(P<0.05),细胞增殖活跃(P<0.05),胶原合成升高(P<0.05)。与Hypoxia组和Hypo+pGCL-GFP组比较,Hypo+CTGF-ShRNA组低氧诱导的CFsCTGFmRNA表达被抑制(P<0.01),CTGF蛋白合成降低(P<0.01),细胞增殖被抑制(P<0.01),胶原合成减少(P<0.01)。结论 CTGF-ShRNA抑制低氧诱导的CFsCTGFmRNA表达和蛋白合成,抑制低氧诱导的CFs细胞增殖和胶原合成。

• 单位
  四川大学华西医院