Ang Ⅱ联合TNF-α促使肾小管上皮HK-2细胞发生程序性坏死

作者：朱永俊; 俞容; 李晓燕; 王颖; 沈婕; 王善志; 崔红旺^*

来源：中国病理生理杂志, 2021, 37(06): 1084-1090.

DOI：10.3969/j.issn.1000-4718.2021.06.016

• 血管紧张素Ⅱ
• 肿瘤坏死因子α
• 程序性坏死
• 受体相互作用蛋白3
• 活性氧簇

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)是否能促使肾小管上皮细胞发生程序性坏死及其可能机制。方法:将HK-2细胞分为正常对照(control)组、AngⅡ组、TNF-α组、AngⅡ+TNF-α组、AngⅡ+TNF-α+necrostatin-1(Nec-1)组、AngⅡ+TNF-α+zVAD组或AngⅡ+TNF-α+GSK’872组和AngⅡ+TNF-α+NSA组。采用透射电镜观察HK-2细胞的超微结构;激光共聚焦显微镜观察TUNEL和RIP3蛋白在HK-2细胞的表达情况;Western blot检测HK-2细胞RIP3和MLKL及其磷酸化蛋白水平的变化;应用荧光标记法检测各组细胞活性氧簇(ROS)的水平。结果:与正常对照组相比,AngⅡ、TNF-α或AngⅡ+TNF-α诱导的HK-2细胞中均有大量呈明显的坏死形态学特征的细胞,TUNEL+RIP3+细胞数明显增多(P<0.01);程序性坏死标志性分子RIP3、MLKL及其磷酸化蛋白水平明显增加(P<0.01);ROS水平明显增高(P<0.01);且AngⅡ+TNF-α组较AngⅡ组和TNF-α组发生程序性坏死的HK-2细胞数量更多。与AngⅡ+TNF-α组比较,Nec-1降低了HK-2细胞的坏死率(P<0.01),而zVAD可增加HK-2细胞坏死率(P<0.01),且Nec-1、GSK’872和NSA均降低了HK-2细胞RIP3、p-RIP3、MLKL和p-MLKL蛋白及ROS的水平(P<0.01)。结论:AngⅡ联合TNF-α或AngⅡ和TNF-α单独刺激均能诱导肾小管上皮细胞发生RIP3/MLKL依赖的程序性坏死。ROS可能是HK-2细胞程序性坏死关键的下游信号分子。

• 单位
  海南医学院第一附属医院