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摘要
目的建立一种高效灵敏的环介导等温扩增(LAMP)方法检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴。方法以华支睾吸虫ITS2基因序列为靶序列,合成Cs-1、Cs-2、Cs-3三组LAMP引物体系。以华支睾吸虫囊蚴DNA样本为模板,日本血吸虫成虫、带绦虫成虫、蛔虫虫卵及其他吸虫囊蚴DNA样本为参考,比较三组引物体系的特异度;以不同浓度的华支睾吸虫成虫基因组DNA为模板,比较三组引物体系的灵敏度;用LAMP法及PCR法平行检测16份华支睾吸虫囊蚴样本和23份其他吸虫囊蚴样本,评价LAMP法的敏感性和特异性。结果三组引物体系的灵敏度及特异度以Cs-3为最优,以其建立的LAMP法反应体系,检测华支睾吸虫成虫DNA的最低检出浓度可达到3.33×10-4 ng/μL,敏感性和特异性与PCR法一致,均为100%。结论成功建立了一种可用于检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的LAMP方法,为淡水鱼寄生虫病监测工作提供了便捷高效的检测手段。
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