HCVNS5A-B片段的表达及在酶活性研究中的应用

作者：胡巍; 刘文; 宋晓国; 朱翠侠; 凌世淦

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2006, (01): 43-46.

• 丙型肝炎病毒
• 非结构蛋白5A-B
• 原核表达
• pBVIL1 HCV
• NS5A-B
• prokaryotic expression
• pBVIL1

目的利用原核表达载体pBVIL1,表达丙型肝炎病毒非结构蛋白3(NS3)丝氨酸蛋白酶催化底物NS5A-B小分子,为进一步研究蛋白酶活性提供方法学。方法将PCR合成的NS5A-B(2412-2427aa)基因直接插入高效原核表达载体pBVIL1,融合表达NS5A-B片段,包涵体形式的表达产物用8mol/L脲溶解后,采用离子交换和凝胶过滤两步纯化。利用SDS-PAGE、Western blot和ELISA方法,于37℃酶催化条件下,分析NS5A-B底物的降解活性。结果(1)构建了pBVIL1/NS5A-B重组质粒,鉴定证明NS5A-B基因片段正确地插入表达载体上。融合蛋白在转化质粒的HB101菌中...

• 单位
  山东理工大学; 军事医学科学院基础医学研究所