T7噬菌体穿孔素的克隆表达及对宿主损伤研究

作者：徐海; 鲍熹; 董洪燕; 郭长明; 邓碧华; 卢宇; 朱善元^*

来源：江苏农业科学, 2020, 48(24): 45-49.

DOI：10.15889/j.issn.1002-1302.2020.24.008

• 穿孔素
• 表达
• 宿主损伤
• T7噬菌体

为研究T7噬菌体穿孔素(Holin)蛋白对宿主细菌的增殖性能的影响,根据T7噬菌体gene 17.5设计引物,PCR扩增Holin基因和序列分析,将该基因插入原核表达载体构建重组表达菌BL-Holin。IPTG诱导Holin蛋白表达,SDS-PAGE和Western-blot检测目标蛋白。分光光度法测定Holin蛋白对宿主细菌增殖性能的影响,扫描电镜观察重组菌诱导后表面结构的损伤情况。结果表明,成功扩增Holin基因,构建的重组菌能高效表达Holin蛋白。T7噬菌体Holin蛋白含有1个跨膜区,氨基端位于胞外、羧基端位于胞内。Holin蛋白的表达量随诱导时间延长而逐渐增加,细菌浓度从诱导0 h至2 h逐渐升高,2 h后细菌浓度开始下降,直至6 h,电镜观察发现诱导细菌表面塌陷、皱缩进而死亡。研究结果显示,Holin蛋白具有抑菌活性,这为进一步开发噬菌体抗菌制剂提供应用基础和技术支持。

• 单位
  江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室; 江苏农牧科技职业学院; 江苏省农业科学院