肺炎支原体黏附蛋白P30的高效表达及初步应用

作者：王成红; 于传亭; 张奇舒; 李鹏飞; 王晓丹; 修冰水; 张贺秋

来源：生物技术通讯, 2014, 25(06): 821-823.

• 肺炎支原体
• P30黏附蛋白
• 优势密码子
• 原核表达

目的:克隆表达肺炎支原体黏附蛋白P30,为临床诊断试剂和疫苗研制打下基础。方法:采用大肠杆菌优势密码子设计P30蛋白优化基因序列,采用Genscript软件评价设计基因的密码子适应指数(CAI),并利用载体p BVIL1实现P30优势表位基因在大肠杆菌中的表达,采用ELISA法对纯化的P30抗原活性进行测定。结果:野生P30基因的CAI为0.59,优化P30基因的CAI为0.84;在大肠杆菌中表达的IL1-P30融合蛋白的相对分子质量为43.5×103,纯化后的重组抗原能与肺炎支原体感染者血清发生特异性免疫反应,灵敏度和特异性分别为82.35%和89.36%,ROC曲线下面积为0.9088。结论:采用密码子优化技术实现了肺炎支原体黏附蛋白P30在大肠杆菌中的高效表达,获得的重组P30蛋白具有很好的抗原性,可用于肺炎支原体诊断试剂的研究。

• 单位
  烟台市烟台山医院; 军事医学科学院基础医学研究所