pBR322-Red在大肠杆菌lac操纵子基因敲除和敲入中的应用

作者：陈伟; 于梅; 李山虎; 王鸣刚; 周建光

来源：生物工程学报, 2005, (02): 192-197.

• pBR322-Red
• 同源重组
• lac操纵子
• 敲除
• 敲入

pBR32 2 - Red是一种新型重组工程系统 ,它携带了λ 噬菌体Red重组酶基因和一系列调控元件。对pBR32 2 Red最优重组条件进行探索后应用该质粒提供的体内同源重组功能 ,在菌株W3110体内 ,对染色体上的lac操纵子进行了基因修饰 ,包括 :①运用kan- sacB选择反选择方法和重叠引物方法敲除了阻遏基因lacI,②运用kan -sacB选择反选择方法和线性双链DNA介导的DNA重组方法将报告基因lacZ敲入lacA和lacY的位置 ,并且首次测定了报告基因lacZ在这三个结构基因位置的组成性表达情况。结果表明运用不同的重组策略 ,pBR32 2- Red系统都能方便有效地对大肠杆菌W3110染色体进行基因敲除和敲入修饰。

• 单位
  厦门大学; 生命科学学院; 军事医学科学院