基于MDCK悬浮细胞灌注培养的流感病毒生产过程开发

作者：吴熠潇; Thomas Bissinger; Yvonne Genzel; 刘旭平^*; Udo Reichl; 谭文松^*

来源：生物技术通报, 2020, 36(10): 247-255.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-1228

• MDCK细胞
• 流感病毒
• 灌注培养
• semi-perfusion

为了提升用MDCK悬浮细胞培养生产流感疫苗的效率,克服目前存在的产能低下问题,以期满足日益增长的流感疫苗市场需求和提升应对大流行爆发的能力。通过病毒驯化、稀释流加条件下的细胞生长和产毒能力分析、Semi-perfusion中的细胞高密度培养可行性分析以及ATF灌注反应器过程验证完成过程开发。驯化的病毒加速了其在细胞内的感染扩增,且在稀释流加培养中获得(3.57±0.17)log10(HAU/100 μL)的病毒滴度。Semi-perfusion可实现细胞高密度培养至40×106 cells/mL以上,病毒产量达4 log10(HAU/100 μL)以上,同时发现MOI和胰酶浓度对病毒的复制过程存在显著影响。在反应器中的ATF灌注培养过程得到了与Semi-perfusion相近的细胞密度及更高的病毒产量4.37 log10(HAU/100 μL),并且通过降温措施维持了高密度下的单细胞病毒产量,克服了"细胞密度效应"。建立了基于MDCK悬浮细胞ATF灌注培养的流感病毒生产平台,通过同时提高细胞密度和单细胞病毒产率提升了流感病毒的生产效率,为基于细胞培养的流感疫苗产业化生产提供了新选择。

• 单位
  华东理工大学; 生物反应器工程国家重点实验室