干扰素诱导的跨膜蛋白-1基因的扩增、克隆及蛋白表达

作者：刘宇虎; 钟东; 柳娟; 张振书; 陈村龙; 武金宝; 肖冰; 郭文英

来源：第一军医大学学报, 2005, (10): 1221-1224.

• 干扰素
• 跨膜蛋白-1基因
• 大肠肿瘤
• PCR
• 克隆
• 蛋白表达

目的研究干扰素诱导的跨膜蛋白-1(interferon-inducibletransmembraneprotein-1,IFITMP-1)基因的扩增、克隆及蛋白表达。方法以含IFITMP-1基因的cDNA为模板,用Pfu酶做PCR扩增,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,将目的基因克隆到pUCm-T质粒测序。进一步克隆到pET-Trx蛋白表达载体质粒,优化蛋白表达条件。结果含有IFITMP-1基因的PCR产物约1000bp。重组pUCm-T质粒经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切,有相应大小的cDNA片段插入,测序结果显示其序列正确,证实目的基因的扩增、克隆成功,并成功克隆进pET-Trx蛋白表达载体,经IPTG诱导,在BL21(DE3)plysS中有融合蛋白表达。结论成功扩增克隆IFITMP-1基因,并成功表达该基因编码的蛋白,为进一步研究IFITMP-1基因在大肠癌中的作用奠定了基础。

• 单位
  南方医科大学南方医院; 东莞市人民医院