水稻OsVDAC4诱饵蛋白载体的构建及鉴定

作者：白雪琪; 谭艳平; 覃永华; 王亚楠; 杨武; 龚秋涵; 刘学群; 王春台^*

来源：安徽农业科学, 2018, 46(36): 90-124.

DOI：10.13989/j.cnki.0517-6611.2018.36.024

• OsVDAC4
• 诱饵蛋白载体
• 膜蛋白酵母双杂交

[目的]获得可用于筛选膜蛋白酵母双杂交文库的诱饵蛋白载体。[方法]在对Os VDAC4进行生物信息学分析的基础上,将Os VDAC4全长ORF分别与p BT3-N和p BT3-SUC连接,构建2个诱饵蛋白载体p BT3-Os VDAC4-N-Cub和p BT3-SUC-Os VDAC4-C-Cub,利用膜蛋白酵母双杂交技术鉴定出可用于筛库的诱饵蛋白载体。[结果]p BT3-Os VDAC4-N-Cub和p BT3-SUC-Os VDAC4-C-Cub都可以与目标蛋白互作,但由于Os VDAC4的N端有约50个可自由伸展的氨基酸残基导致p BT3-Os VDAC4-N-Cub本底反应非常强,Os VDAC4的C端存在于膜中而没有可自由伸展的氨基酸残基,p BT3-SUC-Os VDAC4-C-Cub的本底反应很弱。[结论]p BT3-SUC-Os VDAC4-CCub可用于文库筛选,这为获取Os VDAC4的互作蛋白提供了基础。

• 单位
  生命科学学院; 中南民族大学