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摘要
旨在探究Hfq与GcvB可能的作用结合位点，本研究首先筛查GcvB中Hfq结合偏好型富U基序。通过λ-Red同源重组酶系统构建GcvB富U基序突变或截短菌株，构建GcvB终止子茎延伸菌株。运用P22噬菌体转导技术构建相应的hfq基因缺失菌株以及oppA::lacZ基因融合菌株。通过qRT-PCR检测重组菌株的gcvB基因转录水平，β-半乳糖苷酶试验检测oppA基因编码蛋白水平。预测结果显示，GcvB存在2个Hfq结合偏好型富U基序U5和U8。qRT-PCR结果显示，U5基序的突变未造成gcvB基因转录水平明显的变化，而gcvB基因转录水平随U8基序的截短而下调，截短为U5和U4时下调最为明显，分别下调40.5%和37.5%。延伸U4截短菌株的GcvB终止子茎，结果发现，gcvB基因转录水平几乎恢复到了对照组的水平，同时也发现，尽管U4截短菌株gcvB基因转录水平得以恢复，却丧失了Hfq协同GcvB转录后负调控oppA mRNA的能力。以上结果表明，U5基序与Hfq维持GcvB稳定性无明显关联。U8基序对Hfq协助GcvB转录后负调控oppA mRNA以及维持GcvB稳定性是重要的，推测其为Hfq与GcvB的作用结合位点。
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单位贵州省农业科学院; 贵州大学; 动物科学学院
