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摘要
建立幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）毒力基因数字PCR检测体系，为Hp诊疗提供一个精准、灵敏的毒力定量检测方法。根据Hp毒力基因vacA和cagA的序列设计特异性引物和探针，采用质控菌评估检测特异性；以梯度法设置引物浓度和退火温度，对反应体系及反应条件进行优化；以梯度稀释的DNA为模板，评估检测灵敏度；采用不同浓度模板开展重复性检测，评估检测精密度。结果显示，所设计的引物和探针可特异性地检测vacA和cagA基因，不受大肠杆菌等细菌干扰。vacA和cagA基因的最佳反应温度分别为55.0℃和57.9℃，最佳引物工作浓度分别为650 nmol/L和550 nmol/L，线性分析的拟合度R2分别为0.999 1和0.999 5，不同浓度样品的变异系数（CV）值均小于10%。本研究建立的Hp毒力基因vacA和cagA数字PCR检测体系具有特异、灵敏和重复性好等优点，可为Hp病理诊疗和科学研究提供精准、可靠的技术支持。
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