斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因pET22b载体的构建及表达

作者：邱宗文张锡林王英段文元

来源：中国寄生虫病防治杂志, 2005, (03): 187-191.

• 斯氏狸殖吸虫
• 半胱氨酸蛋白酶
• pET22b栽体  Pagumogonimus skrjabini
• cysteine protease
• pET22b

目的构建含斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的pET22b(+)表达载体,利用SDSPAGE和免疫印迹分析阳性克隆菌株的诱导表达及其表达产物的免疫原性。方法提取斯氏狸殖吸虫成虫总RNA,经RTPCR扩增及T/A克隆后测定其核苷酸序列并进行序列查询与比对。根据已获得的序列和pET22b(+)载体的内切酶位点信息设计引物并再次进行T/A克隆,阳性克隆质粒经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段与pET22b(+)载体连接并转化至BL21(DE3)菌株,收集经IPTG诱导表达后的菌液进行SDSPAGE和免疫印迹分析。结果SDSPAGE显示,经诱导表达的阳性克隆菌株、未经诱导菌株与空载体菌株之间的蛋...

• 单位
  新桥医院; 中国人民解放军陆军军医大学