R 122L突变提高重组人阴离子型胰蛋白酶的稳定性的研究

作者：马强; 吴倩; 李素霞

来源：中国生化药物杂志, 2014, 34(02): 61-67.

• 重组人阴离子型胰蛋白酶
• 点突变
• R122L
• 稳定性

目的研究自切位点突变R122L对重组人阴离子型胰蛋白酶稳定性的影响。方法在大肠杆菌中表达重组人阴离子型胰蛋白酶和R122L突变体,并进行纯化,对纯化后酶及其突变体的稳定性进行对比研究。结果 mhT2(R122L)发挥催化活力的最适pH为711;低温及酸性环境中稳定性较好,其活力在pH 7.6条件下同样能被典型的金属离子螯合剂(如EDTA)、还原剂(如β-ME)、变性剂、Fe3+及丝氨酸蛋白酶抑制剂所抑制,以N-苯甲酰-L-精氨酸(n-benzoyl-l-arginine ethyl ester,BAEE)作为底物时的米氏常数为0.010mmol/L。结论相比于hT2野生型,R122L突变体蛋白最适pH范围增大,耐热性能也有所提高,与底物BAEE的亲和力增强,同时对于Fe3+、金属离子螯合剂、还原剂以及变性剂等的耐受力也有增强,稳定性大大提高。

• 单位
  华东理工大学; 生物反应器工程国家重点实验室