卵清蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

作者：李妮; 朱文勇; 宋绍辉; 马磊; 高菁霞; 廖国阳^*; 李卫东^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(07): 850-861.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003945

• 卵清蛋白
• 鸡胚
• 双抗体夹心ELISA

目的 建立卵清蛋白（ovalbumin,OVA）双抗体夹心ELISA检测方法并进行验证，以用于流感疫苗中OVA含量的测定。方法 以兔抗OVA多克隆抗体作为包被抗体，HRP标记的兔抗OVA多克隆抗体作为检测抗体建立OVA双抗体夹心ELISA检测方法。对包被抗体浓度（2、1、0.5、0.25μg/mL）、酶标抗体浓度（0.5、0.25、0.125μg/mL）、封闭液（1%BSA、2%BSA、1%BSA+1%蔗糖、2%BSA+2%蔗糖，以未封闭为对照）进行优化，并确定Cut-off值作为判断标准。对方法的线性范围及检测下限、特异性、重复性和准确度进行验证。结果 该方法的最适检测条件为：包被抗体浓度1μg/mL，酶标抗体浓度0.25μg/mL；封闭液为2%BSA+2%蔗糖；Cut-off值为0.051 66。该方法线性范围为5～0.313 ng/mL，检测下限为0.078 ng/mL；与流感病毒、牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）、Vero细胞上清液等均不发生反应；板内变异系数（CV）在2.562%～13.887%之间，板间CV在4.000%～16.497%之间；该方法检测结果与德国SERAMUN OVA定量检测试剂盒检测结果的符合率在93.79%～107.05%之间。结论 建立的OVA双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性、重复性、线性范围及准确度，且操作简便、成本低，可用于OVA的定量检测。

• 单位
  中国医学科学院医学生物学研究所