巢式-荧光定量PCR技术快速检测生殖支原体

作者：付牧青; 薛耀华; 李以圣; 牛丛; 王湘雨; 华颖; 唐时幸; 万成松^*

来源：中国皮肤性病学杂志, 2019, 33(08): 972-976.

DOI：10.13735/j.cjdv.1001-7089.201806054

• 生殖支原体
• MgPa基因
• 巢式-荧光定量PCR

目的建立生殖支原体巢式-荧光定量PCR快速检测技术。方法针对生殖支原体MgPa基因的保守片段(1 414～1 561bp),利用Primer express 3.0设计引物及探针,巢式PCR扩增临床样本,纯化后克隆到载体,制备阳性标准品。优化PCR反应条件,研究其特异性、灵敏性和重现性。结果构建了含MgPa基因的重组质粒,以不同浓度的重组质粒制作标准曲线,在101～109拷贝数之间有较好的线性关系。该方法检测阳性率高达15.4%,能特异性检测生殖支原体,而人型支原体、解脲脲原体、沙眼衣原体等检测为阴性;灵敏度高,可检测到10个拷贝数;3组重复试验的变异系数均小于3%。结论本研究建立了生殖支原体的快速检测技术,具有检测阳性率高、特异性强、灵敏度高、重现性好等特点。

• 单位
  南方医科大学; 南方医科大学皮肤病医院; 公共卫生学院