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摘要
目的:建立高纯度的新生SD大鼠皮质神经元原代培养方法。方法:取24 h内的新生SD大鼠皮质,用木瓜酶和DNaseⅠ共同消化,5%胎牛血清终止消化,吹打分离组织获得单细胞悬液,进行细胞计数,用无血清DMEM/F12种植培养,4 h后换成用无血清Neurobasal配制的维持培养液继续培养,尼氏小体染色和免疫荧光法鉴定神经元的纯度。结果:培养第10 d,神经元胞体饱满,结构清晰完整,光晕明显,折光性强,可见粗长的树突和轴突,相邻细胞形成紧密网状联系,神经元纯度达到96%以上。结论:经改良和优化,无须添加阿糖胞苷抑制胶质细胞的生长即能够获得生长状态良好、高纯度的神经元。
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