摘要
[目的]获得枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CotA漆酶活性及热稳定性提高的突变体并用于靛蓝脱色。[方法]利用易错PCR技术筛选获得2株酶活提高的漆酶突变体A1、A2,测定酶学性质,并进行靛蓝脱色研究。[结果]突变体A1、A2的最适pH值均为5.5,最适温度均为70℃;A1、A2在pH值2~7范围内,孵育30 min,剩余酶活均在40%以上,相比野生型(35%以下)有明显提高;A1、A2的比酶活为74.31 U/mg和80.96 U/mg,相比野生型(27.04 U/mg)分别提高了1.75倍、1.99倍;酶的三维结构分析显示,形成的4个突变位点中,1个突变位点通过氨基酸的替换,降低了主肽链的构象自由度,其余3个突变位点在漆酶的整体结构上引入了新的氢键;靛蓝染料脱色结果表明,3种漆酶对靛蓝的12 h脱色率均超过60%。[结论]筛选出来的漆酶突变体A1、A2,在pH值2~7范围内和65~80℃范围内的活性和稳定性比野生型显著提高,在靛蓝脱色等领域具有良好的应用基础。
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