人源3-巯基丙酮酸转移酶抑制剂的发现和作用机制研究

作者：杨蓉; 周越洋; 吴方^*

来源：生物技术, 2021, 31(03): 224-232.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2021.03.0035

• hMST
• H2S
• NO
• 抑制剂
• 药物筛选

[目的]旨在发现硫化氢产生酶—人源3-巯基丙酮酸转移酶(hMST)—的新型抑制剂并研究其作用的分子机制。[方法]利用点突变克隆了hMST的突变体,建立了hMST野生型和突变体的原核表达和纯化方法。基于192串联双孔板法,建立了hMST的高通量抑制剂筛选方法,并筛选得到1类NO供体抑制剂。利用改进的"双孔板"方法,进行了NO供体抑制剂的分子机制研究。[结果]经过原核表达和纯化,成功得到具有酶活性的hMST野生型和Cys突变体,并建立了其高通量抑制剂筛选方法。发现NO供体硝普钠SNP可以对野生型酶和突变体酶都具有抑制效果,并且这种抑制效果能够被二硫键还原剂—二硫苏糖醇—部分回复。[结论]发现了一种新型的hMST抑制剂—硝普钠,其IC50值为4.1 mmol/L,发现其能够通过共价修饰hMST的酶活力位点的Cys248残基,达到对酶活性的抑制效果。

• 单位
  上海交通大学