新基因FAM92A1-289与增殖细胞核抗原PCNA相互作用的验证

作者：桂卉; 郭兴荣; 方娟; 沈君豪; 阮绪芝

来源：医学研究杂志, 2016, 45(03): 49-52.

• FAM92A1-289
• PCNA
• 免疫共沉淀
• 相互作用

目的利用免疫共沉淀技术验证未知蛋白FAM92A1-289和PCNA(增殖细胞核抗原)之间的相互作用。方法构建带有嘌呤霉素抗性的载体CMV-SP6--GFP-FAM92A1-289和真核表达载体PCDNA3.1-PCNA,先将CMV-SP6-GFP-FAM92A1-289载体转染入Hela细胞,通过最合适浓度的嘌呤霉素筛选,得到稳定表达FAM92A1-289的Hela/FAM92A1-289细胞,再将载体PCDNA3.1-PCNA转染入Hela/FAM92A1-289细胞,利用免疫共沉淀来验证FAM92A1-289和PCNA之间的相互作用。结果构建的重组表达载体经双酶切、测序鉴定正确,稳定表达株Hela/FAM92A1-289细胞构建成功,PCNA单克隆抗体沉淀蛋白复合物后,用GFP抗体进行Western blot法检测,检测出了GFP-FAM92A1-289蛋白。结论免疫共沉淀证明了FAM92A1-289和PCNA之间存在相互作用。

• 单位
  湖北医药学院附属太和医院