牛结节性皮肤病病毒GPCR基因荧光定量PCR检测方法的建立

作者：原耀贤; 孙铭澮; 黄伟楠; 李康健; 何威; 付强; 马春全; 刘全; 马骏^*

来源：中国兽医学报, 2021, 41(09): 1729-1733.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.09.09

• 牛结节性皮肤病病毒
• 染料法
• GPCR基因
• 实时荧光定量PCR

为了更好地进行牛结节性皮肤病的临床检测,根据GenBank登录的牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的GPCR基因序列,设计并合成1对特异性引物,建立一种基于染料法的实时荧光定量PCR(qPCR)方法。本研究进一步对此检测方法进行了敏感性试验、特异性试验、重复性试验,随后用模拟临床样品进行了验证。结果显示,该方法至少可以检测出的病毒序列含量为7.11×102拷贝/μL;仅对LSDV有特异性扩增;批内重复和批间重复的Cq值变异系数均小于1.5%。模拟临床样品检测结果显示,建立的qPCR方法在临床采集的牛皮肤结节、肛拭子、泪拭子中,能特异性检测出LSDV的序列片段。结果表明,本研究建立的LSDV的qPCR检测方法敏感性高、特异性强、重复性好,能应用于临床诊断。

• 单位
  佛山科学技术学院; 广州市微生物研究所