布鲁氏菌RPA-SYBR Green Ⅰ快速检测方法的建立与应用

作者：张珊珊; 李楠; 郝镯; 孟轲音; 刘军^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2022, (03): 86-135.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.04.0181

• 布鲁氏菌
• SYBR-GreenⅠ
• bcsp31基因
• 重组酶聚合酶扩增
• 敏感性
• 特异性

为了建立一种新型、稳定、可普遍应用的布鲁氏菌检测方法,试验将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)方法与SYBR GreenⅠ结合,根据布鲁氏菌bcsp31基因序列保守区设计1对特异性引物和1条标有biotin、dSpacer、C3 Spacer的特异性探针,建立一种可以检测布鲁氏菌的RPA-SYBR-GreenⅠ方法,对该方法的反应条件和反应体系进行优化,并分析敏感性和特异性,并用该方法和ELISA方法对临床样品进行检测。结果表明:试验成功构建出布鲁氏菌RPA-SYBR-GreenⅠ检测方法。该方法的最佳反应条件为手掌中孵育12 min,闭合手掌即可启动RPA扩增;引物与探针的最佳比例为2.5∶1;最低检测限为1×101 cfu/mL,能够特异地检测出布鲁氏菌;对临床样品的检测结果与ELISA方法一致。说明试验建立的布鲁氏菌RPA-SYBR-GreenⅠ检测方法特异性强,敏感性高,检测速度快,操作简单。