建立体外诱导和检测中性粒细胞胞外诱捕网的方法

作者：朱鏐娈; 张玥; 李国力; 梁顺涛; 郝禹; 李蕊; 曾辉

来源：中华实验和临床感染病杂志(电子版), 2015, 9(03): 405-408.

DOI：10.3877/cma.j.issn.1674-1358.2015.03.028

• 中性粒细胞胞外诱捕网
• 免疫荧光染色
• 游离DNA

目的建立体外诱导和检测中性粒细胞胞外诱捕网的方法,旨在研究中性粒细胞胞外诱捕网(NET)产生和调节的机制。方法分离正常人外周血中性粒细胞,通过内毒素(LPS)和白细胞介素-8(IL-8)体外诱导NET产生。采用免疫荧光染色和激光共聚焦显微成像定性评价NET生成;采用Pico Green染料定量检测细胞上清游离DNA,反映NET生成量。结果 LPS体外刺激中性粒细胞3 h后,与对照组相比,产生大量胞外网状结构(NET),该结构包含DNA、组蛋白和髓过氧化物酶(MPO)成分;同时细胞上清中游离DNA(NET)含量显著升高(P<0.01)。采用IL-8体外刺激中性粒细胞3 h,与上述结果相似(P<0.05)。结论建立了体外诱导和定性、定量检测NET的方法,二者结合能更好地评价NET的产生。

• 单位
  首都医科大学附属北京地坛医院