稳定表达鼠源整联蛋白αvβ6的CHO-677细胞系的构建

作者：朱志坚; 连凯琪; 杨帆; 张伟; 郑海学; 杨孝朴

来源：中国生物工程杂志, 2015, 35(08): 23-29.

DOI：10.13523/j.cb.20150804

• FMDV
• 整联蛋白受体
• αvβ6
• 细胞系

口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种高度接触性传染病,主要侵害偶蹄动物。乳鼠常作为一种重要的实验动物模型用于FMDV的研究;整联蛋白αvβ6是FMDV的重要受体之一。为深入研究整联蛋白αvβ6在FMDV感染乳鼠中所发挥的作用,克隆了乳鼠整联蛋白αvβ6的两个亚基,并将其导入中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO-677)基因组中,构建了稳定表达乳鼠整联蛋白αv和β6亚基的细胞系CHO-677-mαvβ6,并分别选用两种不同血清型的野生型FMDV毒株Asia1/HN/CHA/06和O/BY/CHA/2010感染细胞系来分析细胞系对FMDV的易感性。首先通过PCR和间接免疫荧光试验证明了细胞系中整联蛋白αvβ6在基因水平成功导入,在蛋白水平成功表达。然后,通过实时荧光定量RT-PCR检测病毒RNA拷贝数,并结合TCID50试验测定了代表毒株在两个细胞上的生长曲线。结果表明,与亲本细胞CHO-677相比,细胞系CHO-677-mαvβ6对FMDV更易感,从αvβ6的功能性上进一步验证了细胞系被成功构建。

• 单位
  甘肃农业大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室