人微小非编码RNA-183和MMP-9对食管癌细胞Eca109增殖的作用及其相互调控关系

作者：梁宇强; 王茂生; 梁清; 刘文健; 黄健

来源：广东医学, 2016, 37(07): 981-984.

DOI：10.13820/j.cnki.gdyx.2016.07.007

• 人微小非编码RNA-183
• 基质金属蛋白酶-9
• 食管癌
• Eca109细胞株
• 细胞增殖

目的探讨人微小非编码RNA-183(Hsa-miR-183)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在食管癌组织和食管鳞癌细胞株Eca109中的表达及相互调控关系。方法采用RT-PCR法检测食管癌组织、食管正常组织、正常食管上皮细胞Het-1A和Eca109细胞株中Hsa-miR-183与MMP-9的相对表达水平。构建人HsamiR-183的真核表达载体质粒PmiR-183,以脂质体2000转染至Eca109细胞,Eca109细胞分为3组:空白对照组不含任何质粒或脂质体,阴性对照组含空质粒2 000μg/m L、脂质体20μg/m L,PmiR-183组含PmiR-183 20μg/m L。构建psi CHECK-2-MMP-9-3’UTR载体。WST-8法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR法检测HsamiR-183及MMP-9 mRNA的表达水平,Western blot法检测MMP-9蛋白的表达水平;荧光素酶报告基因实验验证Hsa-miR-183与MMP-9的靶位关系,设计针对MMP-9序列的小干扰RNA,转染Eca109细胞株,检测HsamiR-183的相对表达水平。结果 Hsa-miR-183在食管癌组织和Eca109细胞株中的相对表达水平较食管正常组织和Het-1A细胞株中低(P<0.05),MMP-9在食管癌组织和Eca109细胞株中的相对表达水平较食管正常组织及Het-1A细胞株中高(P<0.05)。与阴性对照组比较,PmiR-183组对Eca109细胞24、48、72 h的增殖抑制率差异有统计学意义(P<0.05),呈时间-效应关系;psi CHECK-2-MMP-9-3’UTR质粒与Hsa-miR-183共转染293T细胞,荧光素酶的活性降低;转染PmiR-183至Eca109细胞后,MMP-9基因mRNA与蛋白表达水平均降低;敲除MMP-9表达之后,Hsa-miR-183的表达水平显著升高。结论 PmiR-183可有效抑制Eca109细胞的增殖,呈时间-效应关系,Has-miR-183可能参与MMP-9在Eca109细胞的表达调控。

• 单位
  安徽中医药大学第一附属医院; 茂名市人民医院; 高州市人民医院