大鼠肝细胞生长因子shRNA慢病毒载体的构建及其效应研究

作者：张加敏; 周祎; 周士源; 冯非儿; 王谦明; 朱晓璐; 王辰骢; 李浩; 张晓辉

来源：临床血液学杂志, 2014, 27(09): 783-789.

DOI：10.13201/j.issn.1004-2806.2014.09.012

• 肝细胞生长因子
• 巨核细胞
• shRNA
• 慢病毒

目的:构建和鉴定大鼠肝细胞生长因子(HGF)shRNA慢病毒载体,为在分子水平进一步研究HGF对巨核细胞成熟与分化能力的影响提供方法。方法:设计并人工合成4对大鼠HGF的shRNA,与酶切后的GV115载体质粒连接,扩增后与辅助质粒共转染293T细胞,收取上清病毒液;PCR检测其在大鼠肾细胞内的干扰效应。结果:阳性克隆电泳结果为341bp,测序分析显示4组质粒中插入的核苷酸序列均为相应的大鼠HGF shRNA序列,GV115-shHGF质粒构建正确;慢病毒滴度为4×108 TU/ml。经PCR鉴定,4组shHGH慢病毒转染目的细胞后,与空白对照组比较,HGF相对表达量分别为:1.99、0.30、0.19、2.41。结论:靶向大鼠HGF的shHGF3慢病毒载体具有最佳的干扰HGF表达的效率。

• 单位
  北京大学人民医院; 北京大学