抗菌肽LL-37在长双歧杆菌中的表达及活性鉴定

作者：王小康; 吴铁松; 刘江红; 谢展雄

来源：中国医药工业杂志, 2018, 49(01): 68-73.

DOI：10.16522/j.cnki.cjph.2018.01.009

• LL-37
• 抗菌肽
• 双歧杆菌
• 转基因
• 分泌表达

LL-37是人源的具有广谱抗菌活性的多肽。为了在食品级微生物长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)内分泌表达活性LL-37,本研究从双歧杆菌内克隆hup基因的启动子和信号肽amy B,再将它们与合成的LL-37基因、复制子片段p MB1一起克隆入p Bluescript II SK(-)载体,得到大肠埃希菌-双歧杆菌表达质粒p Bs-LL-37。p Bs-LL-37经电穿孔法转入长双歧杆菌NCC2705中,经PCR法鉴定的阳性克隆于DMEM液体培养基中培养,用三甲基甘氨酸十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine SDS PAGE)检测到相对分子质量(Mr)约4 500的LL-37多肽。经过30 h的培养,上清液中可有效表达重组LL-37[(77.36±4.61)μg/ml]。琼脂糖孔穴扩散法检测结果显示,重组LL-37对致病性大肠埃希菌K99有显著抑制活性,且与合成的LL-37无显著性差异。抗内毒素能力表明,重组LL-37能显著降低脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞的肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,而且与合成的LL-37相比无显著性差异。

• 单位
  深圳市龙华区中心医院