同源区段长度对In-Fusion技术连接效率的影响

作者：李慧仙; 朱平

来源：中国医药生物技术, 2013, (04): 241-246.

• 定向分子进化
• In-Fusion技术
• 同源区段
• 高通量克隆 Directed molecular evolution
• In-Fusion technique
• Homologous sequence
• High-throughput cloning

目的在目的基因原载体(DNA模板)与克隆载体相同的条件下,探讨了PCR扩增片段(含目的基因)的末端与载体间同源区段长度对In-Fusion连接效率的影响,并建立以In-Fusion技术为基础的高通量克隆方法。方法以糖基水解酶Lxyl-p1-2(2.4kb)基因突变库的构建为例,设计引物使目的基因的两端分别与线性化载体末端含有15~200bp重叠序列,并通过易错PCR方法获得含目的基因的PCR扩增片段,运用In-Fusion技术将PCR扩增片段定向克隆至表达载体pPIC3.5K中。结果对于长度大约为2.4kb的较大片段DNA的克隆,PCR扩增片段的末端与载体间最适同源区段长度约为100bp,此时...

• 单位
  天然药物活性物质与功能国家重点实验室; 药物研究所; 中国医学科学院北京协和医学院