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摘要
目的:用RNA干扰技术下调乳鼠心肌细胞钙调蛋白激酶Ⅱδ(CAMKⅡδ)的表达,观察CAMKⅡδ对心肌细胞肥厚及细胞内钙浓度的影响。方法:构建针对CAMKⅡδ基因的特异性短发夹RNA(shRNA)编码序列的质粒载体pCAMKⅡδshRNA-1,pCAMKδshRNA-2,以含非特异性shRNA编码序列的质粒载体pGenesil-HK(pHK)为对照,转染原代培养的乳鼠心肌细胞,通过半定量RT-PCR和Western blot法检测CAMKⅡδ表达情况,以内参照GAPDH进行标化。用钙荧光指示剂Fura-2/AM结合图像分析各组心肌细胞内钙离子浓度,用3H-LEU掺入量来检验各组心肌细胞在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激下促心肌细胞肥大效应的影响。结果:①pCAMKⅡδshRNA-1使CAMKⅡδ的mRNA和蛋白质表达较对照组分别降低62%和50%,pCAMKⅡδshRNA-2使之分别降低40%和35%,差异有统计学意义。pHK与空白对照组CAMKⅡδ表达差异无统计学意义。②给予AngⅡ(10-7mol/L)刺激48h后,pCAMKⅡδshRNA-1,pCAMKⅡδshRNA-2组的3H-LEU掺入量和细胞内钙浓度显著低于空白对照组和对照质粒(P<0.01)。结论:RNA干扰技术能选择性下调原代培养的乳鼠心肌细胞CAMKⅡδ的表达,并显著抑制AngⅡ的促细胞肥大和促细胞内钙超载的效应。
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