DcR3-RNAi-SW480结肠癌稳转细胞模型的建立及方法优化

作者：于玮; 何平; 陶莹; 李洋; 李晶; 吴涛; 伍冀湘; 戴洁

来源：临床荟萃, 2012, (22): 1964-1967+2025.

• 结肠肿瘤
• 受体
• TNF相关凋亡诱导配体
• RNA干扰
• 稳转 colonic neoplasms
• receptors
• TNF-related apoptosis-inducing ligang
• RNA interference
• stable transfection

目的建立靶向沉默诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)基因表达的DcR3-RNAi-SW480稳转细胞系,并对其条件及方法进行优化。方法构建靶向沉默DcR3基因的siRNA质粒表达载体,转染SW480细胞,并以G418及流式细胞仪筛选稳转细胞。实验分为3组:DcR3-RNAi稳转组、阴性对照组、空白对照组。蛋白质印记法(Western-blot)检测DcR3蛋白沉默情况。分别应用琼脂糖凝胶电泳、甲基噻唑基四唑(MTT)比色法、流式细胞术等方法对脂质体与质粒的比例、G418的筛选浓度、筛选的最佳方式等进行优化。结果 DcR3-RNAi稳转细胞组DcR3表达水平较对照组明显降低;...

• 单位
  首都医科大学附属北京安贞医院; 北京航天总医院; 基础医学院; 首都医科大学