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摘要
[目的]利用原核表达系统制备鸭坦布苏病毒（duck Tembusu virus,DTMUV）NS1蛋白及其多克隆抗体。[方法]利用PCR与核苷酸序列测定方法克隆DTMUV NS1基因，连接至重组表达载体p ET-30a（+），构建重组质粒p ET-NS1，转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞，SDS-PAGE和Western blot进行IPTG诱导表达产物分析与鉴定，从IPTG的浓度和诱导时间进行表达条件优化，并进行表达产物可溶性分析，重组DTMUV NS1蛋白经亲和层析纯化后免疫小鼠，制备鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体，并通过间接免疫荧光试验（IFA）鉴定。[结果]成功克隆DTMUV NS1基因，约1 065 bp，获得重组质粒p ET-NS1，转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)后，可见分子质量约43 ku的特异蛋白，可以与鸡抗DTMUV多克隆抗体发生免疫反应，终浓度为0.8 mmol/L的IPTG诱导2～5 h为DTMUV NS1蛋白最佳表达条件，呈包涵体形式表达，经亲和层析纯化后，成功获得分子质量约43ku的NS1蛋白，蛋白质量浓度为329μg/m L，鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体可以与DTMUV发生特异性免疫反应。[结论]本研究利用原核表达系统表达和纯化DTMUV NS1蛋白，并制备鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体，可为DTMUV致病机制研究和免疫学检测方法建立提供物质材料与技术指导。
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单位动物科技学院; 信阳农林学院
