珍珠黄杨ITS-PCR体系的建立与优化

作者：刘娜娜; 季孔庶

来源：基因组学与应用生物学, 2009, (05): 975-980.

• 珍珠黄杨
• CTAB
• ITS-PCR反应体系
• 起源进化

本研究利用改良CTAB法从珍珠黄杨叶片中提取基因组DNA作为模板,在TaqDNA聚合酶量不变的基础上,利用正交设计L9(34)对4个因素(模板DNA、Mg2 、dNTP和引物)在3个水平上对珍珠黄杨ITS-PCR反应体系进行优化。实验结果表明,在总体积50μL的反应体系中,建立了最佳ITS-PCR扩增条件:Mg2 浓度2.0mmol/L、引物浓度0.3μmol/L、dNTP浓度0.3mmol/L、DNA模板浓度240ng/50μL、TaqDNA聚合酶的用量1.75U/50μL和退火温度56℃,该优化体系保证了珍珠黄杨ITS-PCR产物的纯度和质量要求。珍珠黄杨ITS片段克隆测序后获得的序列长度为642bp,其系统学信息将为珍珠黄杨的起源进化提供有力的分子水平证据。

• 单位
  南京林业大学