鸭瘟病毒疫苗株基因组复制非必需区的筛选

作者：胡玉珍; 陈普成; 丁蕾蕾; 赵玉博; 姜永萍; 陈化兰; 柳金雄^*

来源：中国预防兽医学报, 2018, 40(10): 897-901.

• 鸭瘟病毒
• 复制非必需区
• 重组病毒

为探寻鸭瘟病毒(DEV)基因组中的复制非必需区,本研究在已建立的DEV疫苗株5粘粒拯救系统的基础上,利用转座子随机插入技术,将含eGFP表达框架的基因片段随机插入DEV US区,救获两株表达绿色荧光蛋白的重组DEV(rDEV-us7eGFP、rDEV-us8us1eGFP)。将两株重组病毒在鸡胚成纤维细胞中连续传至20代后,通过PCR、荧光表达鉴定分析,结果显示gfp基因能够在重组病毒中稳定存在并正确表达;生长动力学结果表明,重组病毒在CEF中的增殖效率与DEV疫苗株无显著差异。攻毒保护实验结果表明,将rDEV-us7eGFP和rDEV-us8us1eGFP以105TCID50的剂量免疫SPF鸭后,其对鸭瘟强毒攻击的保护效率与DEV疫苗株一致,均为100%。本研究成功筛选到DEV基因组中的两个可供外源基因插入的复制非必需区,分别位于us7基因内部及us8与us1基因之间,为以DEV为载体构建相关重组疫苗奠定了重要基础。

• 单位
  农业部; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室