基于噬菌体展示技术筛选抑制素α亚基特异性纳米抗体

作者：马继福; 阿德力·克坦; 解津刚; 巴合提·博代; 李振伟; 吾热力哈孜·哈孜汗^*

来源：中国畜牧兽医, 2023, 50(05): 2032-2043.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.05.030

• 抑制素α亚基(INHα)
• 纳米抗体
• 噬菌体展示技术

【目的】通过噬菌体展示技术构建抗抑制素α亚基(INHα)纳米抗体文库，并筛选出针对绵羊INHα的特异性纳米抗体，以期制备出新型抑制素免疫制剂，为提高绵羊外周血促卵泡素(FSH)水平和排卵率做前期准备。【方法】利用pET32a-INHA原核表达载体诱导表达INHα蛋白，并对诱导表达的INHα蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定；用Ni琼脂糖凝胶纯化后的INHα蛋白免疫新疆双峰驼。通过巢式PCR扩增制备骆驼噬菌体展示纳米抗体文库，通过三轮免疫亲和淘选及噬菌体ELISA从该文库中富集和筛选INHα特异性纳米抗体，并通过测序得知纳米抗体的基因序列；用蛋白-蛋白模拟对接初步鉴定该纳米抗体与INHα蛋白的亲和性。【结果】通过原核诱导表达及Ni琼脂糖凝胶纯化得到了大小为36 ku的INHα重组蛋白，通过Western blotting检测到约36 ku的蛋白条带；双峰驼通过6次INHα蛋白免疫抗体效价达到1∶1 024 000;通过巢式PCR获得了400 bp左右的VHH基因，通过电转化等试验构建了库容量为1.05×1012CFU的纳米抗体文库，文库阳性率为94%;通过三轮免疫亲和淘选获得3.0×108 CFU的抗INHα纳米抗体文库，利用噬菌体ELISA获得了4株(VHH-4、VHH-29、VHH-89、VHH-108)INHα特异性纳米抗体，且4株INHα特异性纳米抗体基因序列相似度为80.31%;通过蛋白-蛋白模拟对接鉴定发现4株纳米抗体均与INHα具有较强的亲和性。此外，VHH-4与INHα的总自由能为-576.28 kJ/mol,是4种VHH中的最佳抗体。【结论】成功构建了抗INHα纳米抗体库，并从该库中获取了VHH-4、VHH-29、VHH-89和VHH-108 4株INHα特异性纳米抗体。本研究结果可为纳米抗体在生殖免疫学中的应用提供参考。

• 单位
  石河子大学; 动物科技学院