铁死亡在脂多糖诱导巨噬细胞损伤小鼠模型中的增强作用

作者：王慧星; 韩晨阳; 李全波; 刘靖芷; 马文庭; 周国明; 蒋宁; 史可梅^*

来源：中华疼痛学杂志, 2021, 17(03).

• 铁死亡
• 巨噬细胞
• 线粒体
• 脂多糖类

目的评价铁死亡在脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞线粒体损伤模型中的作用。方法常规培养小鼠RAW264.7细胞, 按随机数字表法将培养的细胞分为4组(n=6):对照组(Con组)、脂多糖组(LPS组)、脂多糖+铁死亡激动剂Erastin组(LPS+E组)和脂多糖+铁死亡抑素Ferrostatin-1组(LPS+F组)。LPS组给予终浓度为1 μg/ml的LPS进行孵育6 h;LPS+E组给予终浓度为1 μg/ml的LPS和浓度为1 mmol/L的含Erastin培养液进行孵育6 h;LPS+F组给予终浓度为1 μg/ml的LPS和浓度为1 mmol/L的含Ferrostatin-1培养液进行孵育6 h。采用Clark氧电极法及JC-1法分别测定线粒体呼吸控制率(RCR)及线粒体膜电位(MMP), 透射电镜下观察细胞内线粒体改变情况, 采用Western blot法测定细胞内铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、长链酯酰辅酶A合成酶4(ACSL4)的表达, 采用荧光探针法测定活性氧族(ROS)和Fe2+含量, 采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)含量。结果与Con组比较, LPS组RCR和MMP均降低(P均<0.05), GPX4表达下调(P<0.05), ACSL4表达上调(P<0.05);线粒体出现线粒体膜增厚、线粒体皱缩、线粒体嵴消失等铁死亡表现, 细胞内Fe2+含量升高(P<0.05), ROS含量升高(P<0.05), MDA含量升高(P<0.05)。与LPS组比较, LPS+E组RCR和MMP降低(P<0.05), GPX4表达下调(P<0.05), ACSL4表达上调(P<0.05), Fe2+含量、ROS含量和MDA含量均升高(P均<0.05)。LPS+F组RCR和MMP升高(P<0.05), GPX4表达上调(P<0.05), ACSL4表达下调(P<0.05), 出现铁死亡变化的线粒体增加(P<0.05), Fe2+含量、ROS含量和MDA含量均降低(P均<0.05)。结论铁死亡增强LPS致小鼠巨噬细胞线粒体损伤。

• 单位
  承德医学院附属医院; 中心实验室; 天津医科大学第二医院