藏茴香ISSR-PCR反应体系的优化

作者：田霞; 周仙莉; 沈宁东^*; 朱惠琴^*

来源：分子植物育种, 2019, 17(08): 2592-2599.

DOI：10.13271/j.mpb.017.002592

• 藏茴香
• ISSR-PCR
• 体系优化
• 正交设计
• 单因素试验

本次试验以藏茴香叶片为试验材料,采用单因子设计和L16(45)正交设计试验相结合的方法,对影响藏茴香ISSR-PCR扩增结果的Taq酶、引物、Mg2+、dNTPs和DNA用量进行优化,并在此基础上,筛选出最适的循环次数和退火温度。结果表明正交试验各因素显著性为Mg2+浓度>dNTPs浓度>Taq酶>DNA用量>引物浓度。在25μL的反应体系中,Taq酶1.0 U、引物0.6μmol/L、Mg2+1.5 mmol/L、dNTPs 0.20 mmol/L、DNA 40 ng为最佳用量,最佳退火温度为55℃,最佳循环次数为30。用不同的引物和不同的藏茴香种质对优化的ISSR-PCR反应体系进行验证,表明确定的优化体系具有稳定性高、重复性好等特性。该反应体系的建立为藏茴香ISSR标记的开发、种质资源的鉴定、遗传多样性分析和分子标记辅助选择育种等提供科学依据。

• 单位
  青海大学农牧学院