长链非编码RNA H19调控小鼠睾丸间质细胞功能的机制

作者：陈勇; 邓华; 李鑫; 范丽玲

来源：福建医科大学学报, 2023, 57(04): 242-257.

• H19
• 睾丸间质细胞
• 睾酮
• cAMP反应元素结合蛋白1
• 3β-羟基类固醇脱氢酶
• 信号转导和转录激活因子1

目的 探讨长链非编码RNA H19对小鼠睾丸间质细胞(LCs)合成分泌睾酮功能的影响及其可能的机制。方法 采用原代小鼠LCs和TM3细胞为研究对象，细胞分为二甲基亚砜(DMSO)组、2-硝基丙烷(2-NP)处理组、si control组、si H19组、si Creb1组、Mimic control组、miR-181c-5p mimic组、Inhibitor control组、miR-181c-5p inhibitor组、si H19+Inhibitor control组和si H19+miR-181c-5p inhibitor组共11组。干扰H19表达后，ELISA法检测其睾酮分泌水平的变化，CCK8法检测LCs增殖变化；生物信息学分析预测各基因的结合位点。RT-qPCR法和Western-blot检测各组小鼠LCs转染后各相关基因及蛋白表达的变化。结果 (1)与si control组比较，si H19组LCs培养液睾酮水平及细胞增殖水平均显著下降(72 h后，P<0.01)。(2)各相关基因之间存在结合位点。(3)与DMSO组比较，2-NP组LCs的p-STAT1表达增加、H19表达明显升高，而miR-181c-5p表达明显降低(P<0.01)。(4)与si control组比较，si H19处理可显著下调LCs的H19、Creb1、HSD3B1和HSD3B6 RNA表达水平并显著上调miR-181c-5p表达水平(P<0.01),si Creb1处理可显著下调Creb1、HSD3B1和HSD3B6 mRNA表达水平(P<0.01);si H19组和si Creb1组Creb1、3β-HSD蛋白表达均明显降低(P<0.01);与Mimic control组比较，miR-181c-5p mimic组H19、Creb1、HSD3B1和HSD3B6 mRNA表达明显降低，miR-181c-5p表达水平明显升高且Creb1、3β-HSD蛋白表达显著降低(P<0.01);与Inhibitor control组比较，miR-181c-5p inhibitor组的各相关基因及蛋白表达呈现与miR-181c-5p mimic组作用相反的效应；与si H19+Inhibitor control组比较，si H19+miR-181c-5p inhibitor组H19表达显著升高，miR-181c-5p表达水平明显降低，Creb1、HSD的mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.01)。结论 H19低表达可通过抑制细胞增殖、miR-181c-5p表达升高、Creb1蛋白表达降低和3β-HSD蛋白表达降低导致LCs合成分泌睾酮能力降低。STAT1/H19/miR-181c-5p/Creb1/3β-HSD通路可能在LCs功能调控中发挥重要作用。

• 单位
  福建医科大学附属协和医院; 基础医学院; 福建医科大学